,选择合适的助溶剂,将蜂胶浸膏溶于ph7.4的磷酸盐缓冲液(pbs),然后配制成40mg/ml的溶液4℃避光保存备用。
1.2.4 配苗 将上述pm90菌液与bb82菌液等量混匀后作为水相,蜂胶乙醇提取液作为佐剂相,水相与佐剂相等量混匀后加入终浓度为0.0xxxx的硫柳汞,置胶体磨中以8000r/min搅拌5min,然后12000r/min搅拌5min。无菌检验合格的,即可分装至疫苗瓶中,加塞、封蜡置4℃保存备用。实验室共生产兔巴氏杆菌-波氏杆菌二联蜂胶疫苗6批,批号分别为:010510、010521、010615、010628、010709和010720。
1.2.5成品检验 xxxx批次的兔巴氏杆菌-波氏杆菌二联蜂胶灭活疫苗均进行了物理性状、无菌检验以及安全检验。其中安全检验分3组进行,每组均使用了不同日龄(30、90、180天)的健康大耳白兔各20只。接种后观察3周,记录家兔的临床反应、体温以及是否有组织病变。xxxx组的试验设计如下:一次单剂量接种组的疫苗接种量为2ml/只;单剂量重复接种组为xxxx接种,中间间隔1周,剂量为2ml/只;一次大剂量接种组的疫苗免疫量为6ml/只,采用皮下多点注射的方式进行。
1.2.6 兔巴氏杆菌—波氏杆菌二联灭活苗的效力试验 兔巴氏杆菌部分取4批二联苗(批号:010521、010615、010709、010720),分为xxxx免疫剂量:1、2、3ml,分别注射1月龄左右的健康家兔各20只,5只作正常对照。3周后每只接种pm90株致死量,观察14天,记录每组的死亡数。
兔波氏杆菌部分取4批二联苗(批号:010615、010628、010709、010720),分为xxxx免疫剂量:1、2、3ml,分别注射1月龄左右的健康家兔各20只,5只作正常对照。3周后每只接种bb82株致病量,以家兔咳嗽、鼻腔排出水样或脓样的鼻液,取鼻腔拭子能分离到bb82株作为发病标准。观察14天,记录每组的发病数。
2 结果
2.1 疫苗的物理性状检验
本品为棕黄色均匀混悬液,长期静置后底部有少许沉淀,可混匀。
2.2 疫苗的无菌检验
待检菌液在sms、t.g、g.a、g.p培养基上进行无菌检验,均无细菌生长。
2.3 疫苗的安全性检验
各批次的疫苗接种家兔后,家兔的体温、食欲无明显变化,注射部位也无红肿及硬结。
2.4 疫苗的效力试验
2.4.1 家兔对巴氏杆菌的免疫保护试验结果 对照组的家兔在3天内全部死亡,从兔体的心、肝、脾、肾中都分离到了巴氏杆菌。2ml以上试验组的死亡保护率均在9xxxx以上(见表1)。
表1 家兔对巴氏杆菌的免疫效力试验
批次
攻毒保护率(﹪)
1ml组
2ml组
3ml组
对照组
010521
60
95
95
0
010615
60
90
100
0
010709
55
100
100
0
010720
65
95
90
0
2.4.2 家兔对波氏杆菌的免疫保护试验结果 对照组的家兔在3天内全部发病并
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